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產(chǎn)品介紹：HepCM肝細(xì)胞培養(yǎng)基是專門針對(duì)體外肝臟細(xì)胞培養(yǎng)開發(fā)的培養(yǎng)基，適于大部分肝臟細(xì)胞貼壁培養(yǎng)。包含5%的胎牛血清以及氨基酸、維生素、有機(jī)和無(wú)機(jī)化合物、激素和生長(zhǎng)因子等多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，含有L-谷氨酰胺，一般無(wú)需額外添加。經(jīng)測(cè)試，多種肝臟細(xì)胞可以在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。每批培養(yǎng)基都經(jīng)過(guò)測(cè)試。本品不含抗生素。
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
| HepCM肝細(xì)胞培養(yǎng)基 | SH002 | 500mL | 980.00 |
或發(fā)送郵件至：jiahang.hu@sdelad.com
應(yīng)用范圍：適用于科研和基于細(xì)胞培養(yǎng)的大規(guī)模生物制品的生產(chǎn)，不可直接作為藥物使用。
儲(chǔ)運(yùn)方法及效期：儲(chǔ)存：2-8℃冷藏；運(yùn)輸：常溫；有效期：12個(gè)月。
培養(yǎng)條件：37℃，5% CO2濕潤(rùn)培養(yǎng)條件。
注意：請(qǐng)使用正確的無(wú)菌操作技術(shù)，最好在II級(jí)A2型生物安全柜中操作。
細(xì)胞復(fù)蘇
1.準(zhǔn)備一個(gè)37℃水浴。
2.從液氮儲(chǔ)存罐中取出裝有冷凍細(xì)胞的凍存管，并立即將其放入37℃的水浴中。
3.在37℃水浴中輕輕旋轉(zhuǎn)凍存管，快速解凍細(xì)胞（<1分鐘），直至管中只剩下少量冰。
4.將凍存管轉(zhuǎn)移到生物安全柜中。打開前，使用70%乙醇小心擦拭凍存管外部。
5.打開管蓋，小心將解凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到已經(jīng)加有5ml培養(yǎng)液的15ml尖底離心管中。
6.200×g離心5-10分鐘收集細(xì)胞。實(shí)際離心速度和持續(xù)時(shí)間因細(xì)胞類型而異。
6.離心后，檢查上清液的澄清度和完整團(tuán)塊的可見(jiàn)性。在不干擾細(xì)胞團(tuán)塊的情況下，無(wú)菌吸掉上清液。
7.加入1ml的新鮮培養(yǎng)液，輕輕地將細(xì)胞重懸于培養(yǎng)基中，然后將其轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)瓶中，置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細(xì)胞傳代
1.從二氧化碳培養(yǎng)箱中取出長(zhǎng)滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶，吸掉陳舊的細(xì)胞培養(yǎng)液。
2.在生物安全柜中，使用不含鈣和鎂的平衡鹽溶液（DPBS，D-Hanks）洗滌細(xì)胞（每10cm2培養(yǎng)表面積需約2 mL）。向培養(yǎng)瓶附著細(xì)胞層的對(duì)側(cè)緩慢添加平衡鹽溶液，以避免干擾細(xì)胞層，并來(lái)回?fù)u動(dòng)數(shù)次培養(yǎng)瓶。
3.無(wú)菌條件下，吸掉平衡鹽溶液。
4.向培養(yǎng)瓶一側(cè)添加預(yù)熱的胰酶溶液；使用足夠的試劑覆蓋細(xì)胞層（每10cm2約需0.5 mL）。輕輕搖動(dòng)容器以完全覆蓋細(xì)胞層。
5.將培養(yǎng)瓶在室溫下胰酶消化約2分鐘。請(qǐng)注意，實(shí)際胰酶消化時(shí)間隨細(xì)胞系不同而異。
6.不時(shí)在顯微鏡下觀察細(xì)胞是否解離。如果細(xì)胞脫離不到90%，則繼續(xù)孵育，每隔30秒檢查解離狀況。輕輕搖晃培養(yǎng)瓶可加速細(xì)胞解離。
7.當(dāng)90%的細(xì)胞已解離時(shí)，添加2倍體積（解離試劑體積的兩倍）的預(yù)熱完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基以終止或減弱消化反應(yīng)。吹吸液體從培養(yǎng)瓶表面吹下細(xì)胞。細(xì)胞懸液以分散細(xì)胞，從細(xì)胞層表面分離培養(yǎng)基。
8.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到一個(gè)15 mL的尖底離心管中，200×g離心5-10分鐘收集細(xì)胞。請(qǐng)注意，離心速度和時(shí)間因細(xì)胞類型而異。
9.將細(xì)胞團(tuán)塊重懸在最小體積的預(yù)熱完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，取出樣品進(jìn)行計(jì)數(shù)。
10.使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀、臺(tái)盼藍(lán)排染法或CountessTM 3自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，測(cè)定細(xì)胞總數(shù)和活細(xì)胞百分比。
11. 將細(xì)胞懸浮液用新鮮培養(yǎng)液稀釋至合適密度接種。（推薦按照1-5×104細(xì)胞/cm2密度進(jìn)行接種），然后將傳代好的細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中。
注意: 如果使用培養(yǎng)瓶，在將其放回培養(yǎng)箱之前，如您使用的不是帶透氣蓋的透氣培養(yǎng)瓶，請(qǐng)先打開瓶蓋，以便進(jìn)行充分的氣體交換。不建議劇烈搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，因?yàn)檫@可能會(huì)損傷細(xì)胞。
細(xì)胞凍存
1.選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。匯合度達(dá)到80%左右，細(xì)胞活率大于90%。
2.細(xì)胞凍存選擇合適的程序降溫冷凍盒(如Nalgene公司的Mr.Frosty梯度程序降溫冷凍盒)。按照操作說(shuō)明，提前加入適量異丙醇置于2-8℃預(yù)冷。
3.小心吸取細(xì)胞培養(yǎng)上清到一個(gè)新的15ml離心管中，100×g離心10min收集條件培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到另一個(gè)新的15ml離心管中，用于配制細(xì)胞凍存液。
4.配制細(xì)胞凍存液：新鮮培養(yǎng)基和條件培養(yǎng)液凍存液等體積混合，然后加入DMSO到終濃度為7.5%。配好的凍存液后置于2-8℃保存。。
4.按照細(xì)胞傳代中的方法消化細(xì)胞，100×g 離心5-10 min收集細(xì)胞，去掉上清，補(bǔ)加細(xì)胞凍存液。按照密度計(jì)算所需的凍存液體積， 最終的凍存的細(xì)胞密度為1-5×106 細(xì)胞/mL。
6.將細(xì)胞懸浮液等分至低溫凍存管中。輕輕混合細(xì)胞以保持細(xì)胞懸浮液均勻。
7.將凍存管放到預(yù)冷的梯度程序降溫凍存盒中,轉(zhuǎn)移凍存盒到 -80℃超低溫冰箱中。
8.將裝有細(xì)胞的凍存管轉(zhuǎn)移到液氮罐中保存。